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技術(shù)文章

ELISA法手工測定的影響因素

點擊次數(shù)：14751 發(fā)布時間：2022/1/12 10:23:59

ELISA法具有靈敏度高、特異性強、重復(fù)性好的特點，并具有操作簡便、無放射性危害的優(yōu)點，因而多年來廣泛應(yīng)用于血站和醫(yī)院的實驗室中，但在測定中常會出現(xiàn)一些誤差和問題。我們通過幾年的實驗觀察，認為影響結(jié)果的因素有如下方面。

1 試劑盒

（1）抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高，實驗中空白對照OD值偏高或假陽性。（2）酶結(jié)合物濃度過高，也會導(dǎo)致OD值假性增高。

2 試驗儀器

（1）加樣器是否經(jīng)過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不精確，會使結(jié)果忽高忽低。（2）每次洗板，應(yīng)檢查洗板機針孔有無堵塞。

3 操作

（1）檢測先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時放回冰箱冷藏，以免造成試驗結(jié)果假性降低。（2）加樣時注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體（抗原）脫落而影響實驗結(jié)果的準確性。（3）洗滌不充分，會使結(jié)果假性增高，過分洗滌呈假陰性。（4）比色時應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時，底部留有水汽，應(yīng)將板底擦干后進行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高。（5）抗原與抗體反應(yīng)達到完全平衡，依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落，溫度低于4℃，影響反應(yīng)速度。總之，由于ELISA實驗的影響因素較多，在實際工作中必須操作規(guī)范、仔細，避免和排除各種因素的影響，使之得到準確可靠的檢驗結(jié)果。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司